牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的截短表达与鉴定

摘要

利用牛病毒性腹泻病毒(BVOV)BA株接种MDBK细胞,提取病毒RNA.参照已发表的BVDV基因组序列,利用Oligo 6生物学软件设计扩增E2基因的1对引物,引入酶切位点并去掉E2蛋白的跨膜区及疏水区.通过RT-PCR扩增了长约1 000 bp的E2基因片段,克隆到pMD18-T载体上,酶切并测序鉴定.然后将目的片段进一步定向克隆到pET30a表达载体,转化BL21表达菌.取转化菌培养,并用IPTG诱导,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白.将重组蛋白变性、纯化和复性后,用免疫印迹与间接ELISA检测表明纯化的重组蛋白具有良好的免疫原性,为牛病毒性腹泻病毒诊断试剂的研制奠定了基础.