超级细菌blaNDM-1基因TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

为建立快速检测超级细菌编码新德里金属β-内酰胺酶1 (NDM-1)的blaNDM-1基因的方法,本研究针根据blaNDM-1及其变异体的基因序列设计一对特异性引物和一条MGB探针,以构建的含有blaNDM-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,经条件优化,建立了检测blaNDM-1基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法.结果显示该方法可以特异性扩增blaNDM-1基因重组质粒标准品,而对鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌和鼠伤寒沙门氏菌的标准菌株扩增均为阴性;检出下限为2.59拷贝/μL,比常规PCR敏感性高100倍;组内及组间重复性试验的变异系数均小于1.5％.利用所建立的方法对34株鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果均未检测到目的片段,表明所有分离株均未携带blaNDM-1基因.本研究建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于监测携带blaNDM-1基因及其变异体的超级细菌.