利用RFLP分型方法鉴定牛源性链球菌和肠球菌

摘要

为分离及种属鉴定引起牛乳腺炎相关的链球菌和肠球菌,本研究于兰州及周边地区采集疑似奶牛乳腺炎乳样382份,通过THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基初步分离到67株疑似链球菌或疑似肠球菌.参照已发表文献合成链球菌属16S rRNA和16S～23S rRNA间隔区基因引物序列,扩增分离菌株16S～23S rRNA间隔区序列,产物分别利用Alu Ⅰ和Rsa Ⅰ单酶切消化,并以参考菌株的16S～23S rRNA酶切图谱为参考,对分离株进行限制性片段多态性(RFLP)分类分析;再选取各RFLP类群的任一菌株,扩增其16S rRNA基因并测序,并经NCBI核酸数据库进行比对,结果显示67株疑似链球菌中有53株为粪肠球菌(79.1％)、3株为屎肠球菌(4.5％)、3株为肠道肠球菌(4.5％)、8株为无乳链球菌(11.9％).结果表明肠球菌属细菌(粪肠球菌、肠道肠球菌、屎肠球菌)与兰州市及周边地区奶牛乳腺炎的发病紧密相关,肠球菌属细菌与链球菌属细菌16S rRNA基因同源性很高,但可以通过分子生物学方法准确区分.