新布尼亚病毒在非洲绿猴肾细胞中的培养与分离鉴定

摘要

目的应用非洲绿猴肾（Vero）细胞培养并分离鉴定新布尼亚病毒。方法在2009—2011年河南省信阳地区发热伴血小板、白细胞减少综合征病例的血清标本中,筛选出新布尼业病毒RT-PCR检测阳性且保存质量较好的164份标本,在Vero细胞系中培养,观察细胞致病变效应,进行实时荧光RT-PCR、间接免疫荧光检测和电镜观察。选取10份PCR阳性产物进行测序,测序结果与GenBank公布序列进行比对。结果 164份标本经Vero细胞培养,未观察到明显的特异性细胞病变;有67份实时荧光RT-PCR检测阳性,阳性率为40.85%。10份标本的核酸相似度在97.8%～100%之间,与新布尼亚病毒分离株（登录号HQ141600.1）相似度＞99%;67份实时荧光RT-PCR检测阳性标本中有58份间接免疫荧光检测可见特异性的荧光颗粒,对1份实时荧光RT-PCR和间接免疫荧光检测均为阳性的标本进行电镜观察,可见80～100 nm的球形病毒颗粒。结论 Vero细胞适用于新布尼亚病毒的培养、分离和鉴定。