游离脂肪酸和铁诱导非酒精性脂肪肝病的协同作用机制研究

摘要

目的采用游离脂肪酸（FFA）和Fe2+诱导肝细胞建立非酒精性脂肪肝病（NAFLD）模型,探讨FFA和Fe2+在NAFLD发病过程中是否具有协同作用及其作用机制。方法设置对照组（细胞正常培养）,0.250、0.500、1.000 mmol/L油酸组,以及0.500 mmol/L油酸+0.125 mmol/L Fe2+、0.500 mmol/L油酸+0.250 mmol/L Fe2+、0.500 mmol/L油酸+0.500 mmol/L Fe2+组,分别处理人肝癌HepG2细胞,采用油红O染色观察细胞脂质沉积,以磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP）测定细胞内TG的含量,采用RT-PCR法检测脂肪酸β-氧化的关键基因[脂酰CoA合成酶（ACSL-1）、肉碱棕榈酰基转移酶（CFT-1a）、脂肪酸合成酶（FAS）]的表达。分析不同组别TG含量,以及ACSL-1、CPT-1a、FAS mRNA相对值的差异。结果油红O染色结果显示,浓度为0.500 mmol/L的油酸分别与不同浓度Fe2+共同处理HepG2细胞后,随着Fe2+浓度的增加,细胞内脂滴含量逐渐增多。对照组、0.250、0.500、1.000 mmol/L油酸、0.500 mmol/L油酸+0.125 mmol/L Fe2+、0.500 mmol/L油酸+0.250 mmol/L Fe2+、0.500 mmol/L油酸+0.500 mmol/L Fe2+组HepG2细胞中TG含量分别为（90.0±1.6）、（131.7±5.4）、（153.7±3.0）、（254.1±4.0）、（164.5±6.0）、（180.1±7.7）、（235.6±4.5）nmo]/mg（F=396.00,P＜0.05）。0.500 mmol/L油酸、0.500 mmol/L油酸+O.125 mmol/L Fe2+、0.500 mmol/L油酸+0.250 mmol/L Fe2+、0.500 mmol/L油酸+0.500 mmo]/L Fe2+组HepG2细胞ACSL-1 mRNA的表达水平分别为0.94±0.02、0.89±0.04、0.85±0.02、0.74±0.04（F:50.00,P＜0.05）,CPT-1a mRNA分别为0.89±0.03、0.79±0.05、0.67±0.04、0.51±0.05（F=79.OO,P＜0.05）;FAS mRNA分别为1.31±0.05、1.44±0.03、1.51±0.05、1.56±0.06（F=79.70,P＜0.05）。结论用一定浓度的FFA和Fe2+培养HepG2细胞,能够诱导NAFLD模型,二者可能通过影响脂肪酸的β-氧化共同参与NAFLD的发病过程。