牙龈卟啉单胞菌和具核梭杆菌多克隆抗体的制备及应用效果评价

摘要

目的 制备高效价高纯度的牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)和具核梭杆菌(F.nucleatum)多克隆抗体,并评价其应用效果.方法 将新鲜培养的P.gingivalis和F.nucleatum菌液灭活后与佐剂乳化混匀,作为抗原皮下多点注射免疫雄性新西兰大白兔,定期免疫并在抗体效价达到预期后采用颈动脉取血获得抗血清.采用间接ELISA法测定多克隆抗体交叉反应.应用硫酸铵沉淀法纯化多克隆抗体,并通过Western-blot方法鉴定抗体的纯度.荧光显微镜观察多克隆抗体应用于免疫荧光实验的效果.结果 免疫6周后,血清抗体效价达到1∶320000～1∶640000,相互之间未出现交叉反应,且纯度较高.免疫荧光实验中可观察到明显的荧光,并可见P.gingivalis的球杆状形态和F.nucleatum的短杆状形态.结论 成功制备了P.gingivalis和F.nucleatum多克隆抗体,其特异性良好,为后续的免疫学相关实验奠定了基础.