SV40 T基因诱导的人卵巢癌细胞永生化

摘要

目的建立人卵巢癌永生化细胞系,为卵巢癌体外研究提供实验模型.方法利用基因重组技术构建猴肾病毒40(SV40)T抗原基因的高效真核表达载体pcD2-SV40.将其转染10例原代培养的早期传代细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养,建立永生化细胞系.免疫组化检测细胞的上皮起源,用PCR、RT-PCR和Southern Blot方法鉴定SV40 T基因在转染细胞中的表达.观察所建立的永生化细胞系的染色体核型.结果 10例转染细胞中,6例筛选出抗性克隆.角蛋白免疫组化证实3例为上皮起源.其中2例上皮起源细胞得以扩大培养成系,长期稳定传代,分别命名为BUPH:OVSC-2和BUPH:OVCA-3.经鉴定两种细胞系中存在SV40 T在基因水平及转录水平的表达.其染色体核型均符合人体恶性细胞特征.结论利用SV40 T抗原基因进行人卵巢癌原代细胞的永生化是一种可行的、可重复的建系方法,可提高卵巢癌细胞成系机率.