不同荧光定量聚合酶链反应法基因检测肺炎链球菌的比较研究

摘要

目的比较不同荧光定量聚合酶链反应法（PCR）基因检测肺炎链球菌的敏感性和特异性。方法通过设计5种针对肺炎链球菌不同基因的引物[自溶素基因（lytA）、溶菌素基因（ply）、黏附基因（spn9802）、荚膜多糖生物形成蛋白基因（psaA）、编码DNA片段的基因（cspA）],采用荧光定量PCR检测37株肺炎链球菌、28株非肺炎链球菌以及80例临床痰液标本,评价这5种基因检测肺炎链球菌的敏感性和特异性。结果 5种引物均具有较好的检测灵敏度,扩增效率均高于90%。5种引物的Ct值变化均在0.5以内,在PCR扩增时具有可靠的稳定性。利用这5种引物对37株肺炎链球菌和28株非肺炎链球菌进行荧光定量PCR检测,lytA、ply和spn9802特异性较强（检出阳性率和检出阴性率均为100%）。但是lytA、ply的检测下限较spn9802高一个数量级（10~1 CFU/ml比10~2CFU/ml）。psaA和cspA特异性较弱[psaA检出阴性率为89%（25/28）,cspA检出阳性率为97%（36/37）]。对80例临床痰液标本进行检测表明,荧光定量PCR在检测特异性上明显优于传统培养法。5种引物在检测临床痰液标本中存在差异,lytA和ply显示出较好的检出率[阳性率分别为92.50%（74/80）、90.00%（72/80）],spn9802次之[86.25%（69/80）],psaA和cspA特异性最弱[76.25%（61/80）和78.75%（63/80）]。结论临床常用的5种荧光定量PCR基因在检测肺炎链球菌感染中的特异性和敏感性各不相同,lytA和ply特异性最强,spn9802次之,psaA和cspA特异性最弱。