基于入脑成分的网络药理学方法探讨益气通络颗粒保护脑缺血再灌注损伤的作用机制

摘要

目的研究益气通络颗粒(YQTL)保护脑缺血再灌注(I/R)损伤的作用机制。方法①线栓法建立大鼠大脑中动脉阻断(MCAO)模型,按高剂量分别对正常大鼠和MCAO模型大鼠进行YQTL灌胃给药,连续给药3 d,末次给药2 h后进行心脏灌注并取脑组织,利用LC-MS/MS技术检测YQTL入脑成分。②以YQTL入脑成分为基础,利用drugbank数据库、GEO数据库、PharmMapper服务器和Cytoscape 3.7.1软件,运用网络药理学方法,通过蛋白质相互作用、基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析探讨YQTL保护I/R损伤的作用机制。③提取YQTL给药大鼠缺血损伤区脑组织总蛋白,利用Western印迹等分子生物学技术,进一步验证YQTL的作用机制。结果确定了隐丹参酮、洋川芎内酯I和毛蕊异黄酮葡萄糖苷等15个YQTL入脑成分;通过网络药理学方法得到56个YQTL保护I/R损伤的作用靶点。GO分析结果表明,YQTL调控了蛋白质磷酸化和凋亡过程。通路富集分析获得107个KEGG通路(P<0.01),逐一分析后明确靶基因比较集中的3条信号通路。即cAMP、PI3K-Akt和MAPK/ERK信号通路;与模型组比较,YQTL给药组cAMP含量显著上升,PKA,p-CREB,p-AKT和p-PPDK表达增加,p-JNK,p-P38和p-ERK表达下降。结论YQTL通过调控cAMP、PI3K-Akt和MAPK/ERK信号通路发挥对脑缺血再灌注损伤的保护作用。