NOSTRIN基因高表达诱导脐静脉内皮细胞生物活性改变的研究

摘要

目的研究人内皮型一氧化氮合酶运输介导物（endothelialnitricoxidesynthasetrafficinducer,NOSTRIN）基因在体外培养的人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC）中的过度表达对该细胞生物学特性的影响。方法脂质体介导转染体外培养的HU-VEC,G418筛选阳性克隆。免疫组织化学法检测第八因子相关抗原（FⅧRAg）的表达;细胞计数法绘制细胞生长曲线以观察细胞的增殖能力;Western印迹检测细胞中NOSTRIN和eNOS蛋白质的表达;分光光度法和硝酸还原酶法分别测定细胞培养上清中eNOS的活性和NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基（NO2-/NO3-）水平;光镜、电镜观察细胞的形态和超微结构。结果转染前后细胞均为血管内皮来源细胞;转染NOSTRIN基因后细胞的增殖能力明显降低;Western印迹显示细胞转染NOS-TRIN基因后其表达量明显增高,而eNOS蛋白质的表达量在各组细胞之间无差异（P＞0·05）;转染NOSTRIN的细胞培养上清中eNOS活性[（11.727±3.09）U/ml]与转染空载体细胞[（22·69±3·36）U/ml]和对照组细胞[（21.85±3.47）U/ml]比较降低显著（P＜0·01）,同时转染NOSTRIN细胞培养上清中NO2-/NO3-[（25.56±2.49）μmol/L],与转染空载体细胞[（48.37±2.61）μmol/L]和对照组[（49.06±2.78）μmol/L]比较显著降低（P＜0.01）;光镜和电镜观察看到转染NOSTRIN后对HUVEC有损伤作用（HUVEC拉长、微绒毛变短、细胞膜损伤,胞浆内有脂滴空泡,核膜不完整）。结论NOSTRIN的高表达影响了HUVEC的生物学特性,对HUVEC有明显的损伤作用。