牙髓干细胞治疗先天性巨结肠症相关性小肠结肠炎的实验研究

摘要

目的 以Ednrb基因敲除小鼠为动物模型,探讨应用牙髓干细胞（dental pulp stem cells,DPSCs）治疗先天性巨结肠相关性小肠结肠炎（Hirschsprung disease associated enterocolitis,HAEC）的疗效,为临床治疗HAEC寻找新途径。方法 将同龄内皮素受体B基因突变鼠（花斑鼠）按随机数字法平均分为实验组及对照组,每组8只。实验组采用DPSCs腹腔注射的方式,细胞计数为0.5×106/kg,对照组注射同等量PBS缓冲液。正常组采用同龄野生型小鼠（8只）,不做任何处理。对各组小鼠的体重变化、4周时存活情况进行观察记录,对各组小鼠肠炎发生情况进行病理评分。同时观察TNF-α、IFN-γ、TGF-β以及IL-10等炎症因子表达情况,采用免疫荧光技术检测肠道CD4、CD20、CD56及CD68等相关免疫细胞表面标记物表达情况。结果 实验组小鼠寿命明显长于对照组[（26.2±2.5） d比（22.0±3.0） d],4周生存率明显高于对照组（62.50%比16.70%）,组间比较,上述指标比较,差异均有统计学意义（P＆0.05）。2周龄时,对照组小鼠血浆中促炎因子TNF-α、IFN-γ含量分别为35.21±2.08和32.31±7.41,与正常组29.52±0.19和18.94±0.49比较,明显升高,且差异有统计学意义（P＆0.05）。对照组抑炎因子TGF-β、IL-10含量分别为41.38±2.39和53.89±4.90,较正常组14.84±0.02和43.56±0.97明显降低,且差异有统计学意义（P＆0.05）。而DPSCs移植后,实验组TNF-α及IFN-γ含量分别为31.31±0.63和24.75±2.76,与对照组35.21±2.08和32.31±7.41比较,含量明显下降,且差异有统计学意义（P＆0.05）。实验组TGF-β、IL-10含量分别为122.97±0.90和69.00±0.28,较对照组14.84±0.20和41.38±2.39明显升高,组间比较,差异有统计学意义（P＆0.05）。同时,实验组与对照组比较,CD4、CD20、CD56及CD68等免疫细胞表面标记物表达均有降低。结论 牙髓干细胞具有免疫调节、抑制组织炎症介质释放,减轻组织炎症损伤等作用,可明显减轻缓解HAEC的症状,可为临床治疗HAEC提供一个新的方向。