稳定抑制β-catenin表达的神经母细胞瘤细胞株的建立及其对细胞活性的影响

摘要

目的探讨RNA抑制β-catenin表达对人神经母细胞瘤BE2C细胞生物活性的影响。方法通过慢病毒介导的RNAi技术用β-catenin基因的干扰载体PgLV-R质粒及阴性对照质粒PgLV-NC质粒分别侵染人神经母细胞瘤BE2C细胞,运用嘌呤霉素进行抗性克隆的筛选和扩增,获得稳定转染的人神经母细胞瘤BE2C细胞（干扰组和阴性对照组）。然后分别检测各组细胞的增殖、迁移、侵袭和细胞周期及细胞凋亡变化。结果成功建立了稳定抑制β-catenin基因表达的人神经母细胞瘤BE2C细胞株。与空白对照组和阴性对照组比较,干扰组BE2C在细胞增殖速度明显减慢（P＜0.01）。在细胞迁移和细胞侵袭实验中,干扰组细胞迁移数29.8±3.8和透膜数23.5±4.6较空白对照组（94.3±9.3、54.3±5.6）和阴性对照组（62.8±9.8、50.3±5.3）均明显减少,差异有统计学意义（P＜0.01）。细胞周期及凋亡实验显示干扰组细胞主要阻滞于G0/G1期,并能诱导肿瘤细胞凋亡。结论稳定抑制β-catenin表达后可抑制神经母细胞瘤BE2C细胞的体外增殖、侵袭等生物学效应。肿瘤细胞周期减慢及细胞凋亡增加可能是抑制β-catenin表达后引起该生物学效应的主要机制之一。