肾母细胞瘤血清非炎症标记物SAA1和载脂蛋白C-Ⅲ的筛选、鉴定及验证

摘要

目的在排除炎症因子或炎性蛋白干扰的情况下,筛选肾母细胞瘤（Wilms tumor,WT）血清特异性标志物,进一步鉴定与验证,提高肾母细胞瘤血清特异性标记物的敏感度与准确度。方法收集2006年1月至2010年8月郑州大学第一附属医院小儿外科收治儿童的303例血清样本,WT患儿术前血清103例（术前组）,WT患儿术后血清97例（术后组）,健康儿童体检血清103例（对照组）。应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）在排除机体常见炎症因子干扰的前提下,对术前组、术后组和对照组进行筛选并获得特异性蛋白质标记物,高效液相色谱技术（HPIC）和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术（MALDI-TOF-MS）纯化目标血清蛋白,二维液相色谱-线性离子阱质谱联用系统（2D-LC-LTQ-MS）鉴定目标血清蛋白,并通过蛋白质印渍技术（Western-blot）对于以上筛选及鉴定的特异性或者差异性蛋白质进行验证。结果发现两个质荷比（m/z）为11 526 Da和4756 Da的差异性蛋白质,均在术前组中高表达,余两组低表达,术前组与术后组、术前组与对照组比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。经鉴定此两种差异性蛋白质为血清淀粉样蛋白A1(serum amyloid A1,SAA1和载脂蛋白C-Ⅲ。结论本研究获得特异性更强的肾母细胞瘤非炎症性蛋白质标记物SAA1和载脂蛋白C-Ⅲ,并验证了通过这一实验思路和技术流程来鉴定肿瘤蛋白质标记物的可行性,为鉴定其他肿瘤的具有更高特异性的蛋白质标记物奠定了基础