TGFBR1和FGF9蛋白参与miRNA-140-5p调控肾母细胞瘤细胞的增殖过程

摘要

目的本研究拟探讨miRNA-140-5p在肾母细胞瘤增殖过程中的调控作用以及TGFBR1和FGF9蛋白参与此过程的作用机制。方法采用miRNA芯片技术分析肾母细胞瘤患儿肿瘤组织和瘤旁正常组织的miRNA表达谱,结合生物信息学预测和文献报道,选取表达差异显著的miRNA-140-5p作为研究对象,扩大样本进行Real-time PCR验证;MTS方法检测miRNA-140-5p对细胞增殖率的影响;双荧光素酶实验验证miRNA-140-5p的直接下游靶基因;Western-blot法检测TGFBR1蛋白表达;ELISA法检测细胞上清中FGF9蛋白表达。结果发现与瘤旁组织相比,miRNA-140-5p在肾母细胞瘤组织和瘤旁正常组织的相对表达量分别为1.69±0.83和6.37±3.25,肾母细胞瘤组miRNA-140-5p的表达量明显降低（P＜0.05）。在肾母细胞瘤细胞株G401及SK-NEP-1中,发现过表达miRNA-140-5p可有效降低G401及SK-NEP-1的增殖率,将miRNA无关序列（miRNAcon）转染组细胞增殖率设为100%,与其相比,转染miRNA-140-5p的G401细胞组的增殖率为（87±15）%比（100±20）%,SK-NEP-1细胞组为（91±12）%比（100±9）%,组间比较,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）。利用生物信息学软件对miRNA-140-5p直接下游靶基因进行预测,结合肾母细胞瘤相关基因,选择TGFBR1和FGF9基因为miRNA-140-5p的直接下游靶基因;通过双荧光素酶实验证实miRNA-140-5p可直接靶向TGFBR1和FGF9基因。将miRNA-con转染组TGFBR1蛋白表达量设为1,与其相比,过表达miRNA-140-5p的G401及SK-NEP-1细胞内,TGFBR1蛋白表达量降低（G401细胞降为0.67;SK-NEP-1细胞降为0.87）（P＜0.05）。与miRNA-con转染对照组相比,G401及SK-NEP-1细胞上清中FGF9蛋白表达量下降,G401组为（478.66±66.32）pg/ml比（535.64±78.53）Pg/ml,SK-NEP-1细胞组为（486.57±71.01）pg/ml比（601.26±77.68）pg/ml,组间比较,差异均有统计学意义（P值均＜0.05）。结论患儿肾母细胞瘤中miRNA-140-5p表达量低于瘤旁正常组织,miRNA-140-5p影响肾母细胞瘤细胞的增殖,TGFBR1和FGF9蛋白可能参与了miRNA-140-5p调控肾母细胞瘤细胞增殖的过程。