mTOR自噬信号通路和凋亡在DEHP致SD尿道下裂胎鼠中的改变

摘要

目的探讨邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯[Di（2-Ethylhexyl）Phthalate,DEHP]诱导大鼠发生尿道下裂的机制。方法 20只成年孕SD鼠[10～12周龄,体重（240±20g）]按照数字随机化法分为:正常对照组（n=10）和DEHP暴露组(750 mg·kg-1·d-1)（n=10）,于妊娠期（gestation day,GD）第8.5～18.5日每日灌胃,于GD 19.5时剖宫取出胎鼠,以有无睾丸分辨雌雄,并在解剖显微镜下观察有无尿道下裂的发生。测量肛门生殖器距离（anogenital distance,AGD）和肛门生殖指数（anogenital index,AGI）,扫描电镜和HE染色观察阴茎组织形态改变,透射电镜观察阴茎组织内自噬的改变,western blot检测生殖结节（GTs）中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1、Akt、mTOR、p-Akt、pmTOR和凋亡相关蛋白cleaved-caspase3、Bax、Bcl2的表达水平,TUNEL法检测雄鼠GTs中细胞凋亡。结果 DEHP暴露后出现尿道下裂,发生率为27.58%,尿道下裂组中AGD、AGI均明显降低（P＜0.05）;尿道下裂雄鼠的GTs出现腹侧尿道缝融合障碍及尿道开口异位。尿道下裂组GTs中LC3和Beclin1的表达、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加（P＜0.05）,p62、p-AktSer473、p-mTORSer2448表达明显减少（P＜0.05）,Bcl2表达减少（P＜0.05）cleaved-caspase3和Bax蛋白表达水平则明显增高（P＜0.05）,细胞凋亡显著增加（P＜0.05）。结论 DEHP作为一个外源性干扰物进入机体后,致使胎鼠的GTs中PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制,自噬水平增加,同时促凋亡与抗凋亡系统失衡,进一步促进自噬的发生,最终使得凋亡异常增加,导致尿道下裂的发生。