CD8~+细胞毒性T淋巴细胞对HBV感染的巨噬细胞的杀伤作用

摘要

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染的巨噬细胞对CD8^(+)细胞毒性T淋巴细胞杀伤功能的抵抗作用。方法:从健康人群(n=6)和HBV感染患者(n=6)中获得的肝脏活检组织,采用免疫组化方法检测CD68和HBV核心蛋白(HBc)表达。在体外,从外周血单个核细胞(PBMCs)中分离单核细胞衍生的巨噬细胞、CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞,将巨噬细胞和CD4^(+)T细胞暴露于HBV中,并与CD8^(+)T细胞以不同的效应与靶标比率共培养。采用流式细胞术分析HBc^(+)靶细胞的消除、HBV感染巨噬细胞的初始反应和HBV包膜的内化动力学。免疫荧光分析HBV包膜与和驻留蛋白不同的细胞内区室[早期内体抗原1(EEA1)、溶酶体相关膜蛋白1(LAMP1)和唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(Siglec-1)]共定位情况。结果:在来自HBV感染患者的肝脏样本中观察到HBc和CD68的共定位信号。与感染HBV的CD4^(+)T细胞相比,感染HBV的巨噬细胞显著抵抗CD8^(+)T细胞的杀伤(P<0.05)。与CD4^(+)T细胞相比,CD8^(+)T细胞对感染巨噬细胞的反应倾向于产生TNF-α(P<0.01)。相对于HBV包膜与HBc共定位,HBV包膜与Siglec-1共定位显著降低(P<0.01),但仍显著高于与EEA1或LAMP1的共定位(P<0.01)。结论:HBV感染的巨噬细胞能逃避CD8^(+)T细胞的杀伤作用,这可能与HBV包膜被传递到细胞内含病毒区室有关。