回阳生肌汤对糖尿病小鼠皮肤创面愈合及单核巨噬细胞表型转化的影响

摘要

目的:探讨回阳生肌汤对糖尿病小鼠创面愈合的作用及可能的机制.方法:10只db/m小鼠为空白对照组,30只db/db糖尿病小鼠随机分为模型组、回阳生肌汤组和重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组;各组小鼠在造模前称重、检测血糖,背部全层皮肤切除直径为6 mm的创面,外用药物贴敷,隔天换药,创面拍照并计算创面面积.造模7 d后取小鼠背部皮肤组织,采用苏木素-伊红染色观察组织病理学改变;多重免疫荧光染色检测创面组织促炎型(M1型)和抗炎型(M2型)巨噬细胞的数量;蛋白芯片技术检测M1型和M2型巨噬细胞相关蛋白的表达水平;流式细胞术检测小鼠骨髓和血液中总单核细胞、抗炎型单核细胞(Ly6Clow/-)和促炎型单核细胞(Ly6Chi/+)占总活细胞的比例.结果:db/db小鼠体重和血糖显著高于db/m小鼠(P＜0.01).与模型组相比,回阳生肌汤干预可显著提高db/db小鼠创面愈合率(P＜0.01),促进肉芽组织新生,丰富成纤维细胞和血管.多重免疫荧光染色显示,与模型组相比,回阳生肌汤组M1型巨噬细胞数量减少,M2型巨噬细胞增多(P＜0.01).蛋白因子芯片结果显示,回阳生肌汤能抑制白细胞介素1β(IL-1β)、IL-1α、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ(TNF-RⅡ)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达(P＜0.05或P＜0.01).流式细胞术结果显示,与模型组相比,回阳生肌汤组骨髓总单核细胞和Ly6Clow/-单核细胞比例升高,Ly6Chi/+单核细胞比例下降(P＜0.05或P＜0.01),血液中总单核细胞和Ly6Chi/+单核细胞比例下降,Ly6Clow/-单核细胞比例升高(P＜0.01).结论:db/db糖尿病小鼠血糖升高,创面愈合迟缓;回阳生肌汤可提高db/db糖尿病小鼠创面愈合率,减轻创面炎症反应,其机制可能是调节骨髓和血液中Ly6Clow/-/Ly6Ch/+单核细胞平衡,抑制Ly6Chi/+促炎型单核细胞向创面局部募集,促进Ly6Clow/-抗炎型单核细胞募集,从而减少创面中血液来源的M1型巨噬细胞,增加M2型巨噬细胞.