MicroRNA-145通过ADAM28抑制人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化功能

摘要

目的:探讨微小RNA(miR-145)对人肾癌细胞A-498上皮-间充质转化(EMT)功能的影响及其相关机制.方法:将A-498肾癌细胞株分别转染miR-145模拟物(M145)和模拟物阴性对照(MNC),分别作为M145组和MNC组,并设立空白对照(MC)组,采用RT-qPCR法检测各组细胞miR-145水平.Transwell实验检测3组细胞侵袭能力的变化.Western blot法检测3组细胞波型蛋白(vimentin)、E-cadherin和ADAM28表达水平.应用生物信息学方法预测miR-145的靶基因.采用Western blot法检测ADAM28过表达对miR-145抑制EMT的拮抗作用.双萤光素酶报告基因实验验证miR-145与ADAM28的关系.结果:与MC组相比,M145组miR-145的表达水平显著上调(P<0.05).M145组侵袭细胞数量显著低于MC组(P<0.05).M145组细胞vimentin蛋白表达量显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量显著升高(P<0.05),ADAM28蛋白表达量显著降低(P<0.05).ADAM28过表达M145组肾癌细胞中vimentin蛋白表达量显著升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达量显著降低(P<0.05).双萤光素酶报告基因实验结果显示ADAM28为miR-145的下游靶基因.结论:miR-145可能通过降低下游靶基因ADAM28水平影响EMT相关蛋白表达,从而抑制人肾癌细胞A-498的EMT过程.