含人AGM区基质细胞培养体系定向诱导胚胎干细胞为造血干细胞的实验研究

摘要

目的:体外模拟胚胎早期AGM区造血微环境,诱导胚胎干细胞(ESCs)分化为造血干细胞(HSCs).方法:将小鼠E14 ESCs在含BMP-4及VEGF的半固体培养基中诱导为拟胚体(EB),分别于3、6、9、12、15 d时收获EB,流式细胞术检测Flk-1+细胞含量.取Flk-1+ 细胞处于高峰期的EB细胞,在人AGM区基质细胞饲养层上进一步诱导分化,并设无饲养层对照,分别于3、6、9、12 d时收获细胞计数、流式细胞术检测Sca-1+c-kit+ 细胞含量,并分析造血细胞集落形成能力.结果:诱导E14细胞形成EB过程中添加BMP4+VEGF的因子组Flk-1+细胞在第9 d达峰值(27.53%± 2.84%),与未添加因子组(8.77%± 1.12%)比较差异显著(P＜0.05).将培养9 d的EB细胞在hAGMS3、hAGMS4饲养层上进一步诱导分化,第6 d时Sca-1+c-kit+细胞达峰值,分别为7.31%±1.21%、7.62%±1.52%,其绝对数分别扩增(2.57±0.48)倍、(2.35±0.36)倍,与无饲养层组比较显著差异(P＜0.05).该分化阶段的Sca-1+c-kit+细胞具有形成各系造血细胞集落的能力.结论:人胚早期AGM区基质细胞能促进小鼠ESCs定向分化为HSCs,为研究ESCs分化为HSCs的分子机制提供了实验模型.