血红素氧合酶-1 提高无氧无血清条件下骨髓间充质干细胞的生存

摘要

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)是否提高骨髓间充质干细胞(MSCs) 在无氧无血清条件下的存活率.方法:取大鼠骨髓,体外分离扩增培养 MSCs;HO-1腺病毒转染 MSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白 (GFP) 的表达;DAPI 染色观察无氧无血清条件下 HO-1-MSCs、MSCs 细胞核变化;流式细胞仪检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs、MSCs 的凋亡率;ELISA 检测无氧无血清条件下 HO-1-MSCs、MSCs 细胞因子的分泌.用无氧无血清条件下 HO-1-MSCs、MSCs 的培养上清液对无氧无血清条件下的心肌细胞进行培养,Western blotting 检测凋亡蛋白 caspase-3 的变化,分光光度计检测 caspase-3 酶活性.结果:HO-1 转染的 MSCs 可稳定高效地表达 GFP;DAPI 染色后,MSCs 细胞核为典型的凋亡形态,HO-1-MSCs 为较均匀蓝色荧光;HO-1-MSCs 在无氧无血清条件下的凋亡率显著低于 MSCs (P<0 01),且在无氧无血清条件下分泌肝细胞生长因子(HGF)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)、血管内皮生长因子 (VEGF) 水平显著增高 (P<0 01);HO-1-MSCs、MSCs 培养上清液在无氧无血清条件下分别培养心肌细胞,HO-1-MSCs 组caspase-3 蛋白和 caspase-3 活性都显著降低 (P<0 01).结论:无氧无血清条件下,HO-1 提高 MSCs 的存活率;HO-1-MSCs 分泌更多的细胞因子,且对无氧无血清条件下的心肌细胞有保护作用.