腺相关病毒介导的PLB基因反义RNA对糖尿病大鼠心肌肌浆网Ca2+-ATPase活性的作用

摘要

目的:构建磷酸受纳蛋白（PLB）反义RNA腺相关病毒载体（rAAV-asPLB）,建立糖尿病（DM）大鼠模型。直接心肌注射rAAV-asPLB,观察其对DM大鼠心肌PLB基因转录和蛋白表达的影响,以及对心肌肌浆网Ca2+-ATPase活性的作用。方法:利用质粒辅助重组腺相关病毒系统试剂盒构建rAAV-asPLB。腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导DM大鼠模型,将实验动物分为4组:正常组、DM组、盐水组和rAAV-asPLB组。盐水或rAAV-asPLB注射后6周,RT-PCR检测心肌PLBmRNA转录;Westernblotting检测PLB蛋白表达水平;检测心肌肌浆网Ca2+-ATPase活性。结果:（1）成功构建rAAV-asPLB,诱导出DM大鼠模型。（2）DM组和盐水组PLBmRNA水平均高于正常组;rAAV-asPLB组PLBmRNA水平较DM组和盐水组明显降低。（3）DM组和盐水组PLB蛋白水平均高于正常组;rAAV-asPLB组PLB蛋白水平较DM组和盐水组明显降低。（4）肌浆网Ca2+-ATPase活性在DM组和盐水组中较正常组明显降低,而rAAV-asPLB组较DM组和盐水组升高。结论:rAAV-asPLB抑制DM大鼠心肌PLB表达,增强Ca2+-ATPase活性。