恶性疟原虫FCC1/HN株丙酮酸激酶基因的扩增、克隆和序列分析(英文)

摘要

目的　扩增恶性疟原虫海南株FCC1/HN的丙酮酸激酶 (PK)的编码基因 ,构建其原核和真核表达重组质粒 ,测定其序列 ,并了解它及它推导的蛋白质与恶性疟原虫 3D7和人PK基因之间的差异。　方法　根据 3D7的PK基因设计合成一对引物 ,用PCR从FCC1/HN株基因组中扩增PK基因 ;将它分别定向克隆到原核表达质粒PGEX 4T 1和真核表达质粒 pcDNA3 ,分别转化大肠杆菌JM 10 9感受态细菌 ;经酶切、PCR扩增鉴定筛选到阳性重组克隆 ,用双脱氧链末端终止法测定其序列 ,用生物信息学软件分析PK序列及进行同源性比较。　结果　PCR扩增得到特异的FCC1/HN株PK基因 ,大小为 2 2 3 5bp ,编码 744个氨基酸。其氨基酸序列与 3D7的同源性高达 99.9% ,与约氏疟原虫的同源性为 70 .2 % ,但与弓形虫和人的PK的同源性分别只有 2 0 .9%和 2 1.6%～ 2 5 .4%。　结论　从FCC1/HN株基因组中获取了PK基因 ,成功构建了其原核和真核表达质粒 ,并测定了其序列 ;它与 3D7的PK高度同源 ,但与人的PK基因同源性很低 ,可能是一个药物靶标。