实验感染昆明鼠粪便微小隐孢子虫18SrRNA基因检测

摘要

目的 探讨隐孢子虫感染的基因检测方法。方法 用分离自人和牛的微小隐孢子虫各1株分别感染2组昆明小鼠,于接种后第6d、10d和14d分别收集每只动物粪便,用显微镜检查,再用Sheather's蔗糖梯度密度离心法纯化卵囊,提取总DNA,对每份DNA样本做10~0～10^(-3)稀释,然后用PCR对微小隐孢子虫18SrRNA基因进行特异性扩增。结果 接受具有活力的1×10~4个卵囊/只的36只小鼠,均获得感染;阳性样本被扩增出1条500hp的片段。隐孢子虫感染小鼠粪便样本各稀释度的PCR检测实验结果表明,PCR检测阳性率随模板DNA样本稀释倍数的增加而增高;小鼠感染后第6d、10d和14d的10~0和10^(-1)两个稀释度的PCR检测阳性率低于镜检结果,而10^(-2)和10^(-3)两个稀释度均高于镜检结果。结论 受染昆明鼠粪便内的微小隐孢子虫可通过扩增其18SrRNA基因检出。