抗囊虫单抗的制备及其应用研究

摘要

目的　制备分泌特异性抗猪囊虫单抗的杂交瘤细胞株 ,建立以特异性单抗检测囊虫病患者循环抗原 (CAg)的特异敏感的 EL ISA方法。　方法　制备水溶性抗原 (Ag- w)和尿素溶性抗原 (Ag- u) ,将实验用 BAL B/ c小鼠分为 Ag- u和 Ag- w组 ,分别以 Ag- u和 Ag- w免疫 ,取两组免疫鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,EL ISA法进行筛选 ,所获特异性阳性克隆加以扩大培养 ,并分别与包虫、血吸虫、华支睾吸虫、肺吸虫、姜片虫和丝虫抗原进行交叉反应性测定。　结果获得稳定分泌特异性抗囊虫单抗的杂交瘤细胞 5株 ,其中 1株 N1B10来自于 Ag- w组 ,另 4株 U2 A6、U2 B3、UB5 H6和UE10 H5来自于 Ag- u组。对 N1B10、U2 A6和 U2 B3初步鉴定结果表明 ,其抗体类型分别为 Ig G2 b、κ,Ig G1、κ,Ig G2 b、κ;腹水的效价分别为 1.0 2 4× 10 6、1.6× 10 4和 3.2× 10 4 ;免疫组化显示 N1B10定位于囊虫囊壁的基底膜 ,U2 A6和 U2 B3定位于囊虫的头节。杂交瘤细胞经连续培养 ,液氮反复冻存复苏后仍能稳定分泌单抗。取 3株单抗和兔抗囊虫血清建立了检测囊虫病患者 CAg的 EL ISA方法 ,测定 4 8份临床确诊囊虫病病人血清 ,阳性率达 95 .8%。　结论　成功制备了抗囊虫单克隆抗体 ,所建立的 EL ISA方法敏感性高 ,特异性强 ,可用于?