人脐带间充质干细胞对重症急性胰腺炎患者树突状细胞成熟、分化的作用及参与炎症调节的机制研究

摘要

目的探讨人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对SAP患者树突状细胞（DCs）成熟、分化的作用及参与炎症调节的机制。方法采集郑州大学附属郑州中心医院行剖宫产的足月胎儿脐带4～5 cm, 原代分离培养hUC-MSCs, 采用流式细胞术进行表型鉴定和成脂、成骨染色。采集5例SAP患者外周血20 ml, 采用淋巴细胞分离液分离出单核细胞, 以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、IL-4、肿瘤坏死因子（TNF-α）进行诱导培养出DCs, 根据培养方式不同分为DCs组、hUC-MSCs+DCs组、hUC-MSCs+DCs+NS398组（NS398为NF-κB下游调控基因COX-2的特异性抑制剂）。应用流式细胞术检测DCs表型, 测定细胞培养24 h上清液中的IL-1β、IL-1α、IL-2、IL-6 、IL-10水平。采用蛋白质免疫印迹法检测Toll样受体4（TLR4）、IKKα及NF-κB-p65蛋白表达量。结果成功培养出hUC-MSCs, 其表面标志物CD90、CD105、CD73表达阳性, 并可向脂肪细胞、骨细胞分化。随着培养时间延长, DCs由未成熟向成熟分化。与DCs组比较, hUC-MSCs+DCs组的调节性DCs（regDCs）比例增加, 其标志物CD11b显著上调[ （14.26±1.25）%比（4.87±0.58）%], CD1a 、CD11c显著下调[（2.81±0.34）%比（13.62±1.52）%、（3.88±0.5）%比（11.8±1.22）%], 差异均有统计学意义（P值均＆0.05）。培养上清液IL-1β、INF-γ、IL-6表达下调, 但差异无统计学意义;而促炎因子IL-1α显著降低[（14.91±2.58）ng/L比（30.19±7.75）ng/L], 抑炎因子IL-10显著升高[（17.03±4.69）ng/L比（1.83±0.14）ng/L]。NF-κB-p65、TLR4蛋白表达显著下调（0.74±0.02比0.97±0.01、0.89±0.01比1.72±0.01）, IKKα蛋白表达显著上调（1.12±0.01比0.21±0.01）, 差异均有统计学意义（P值均＆0.05）。与DCs组及hUC-MSCs+DCs组比较, hUC-MSCs+DCs+NS398组的NF-κB-p65与TLR4表达量显著下调（0.34±0.01比0.97±0.01、0.74±0.02, 0.14±0.01比1.72±0.01、0.89±0.01）, 而IKKα蛋白表达显著上调（1.68±0.01比0.21±0.01、1.12±0.01）, 差异均有统计学意义（P值均＆0.05）。结论 hUC-MSCs能够抑制SAP患者DCs成熟、分化, 并诱导出CD11bhigh CD1alow CD11clow的regDCs参与免疫调节, 其机制可能通过TLR4/IKKα/NF-κB/COX-2途径抑制炎症级联反应, 发挥抗炎作用。