胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞疫苗诱导特异性抗肿瘤的免疫反应

摘要

目的研究人胰腺癌MUC1 mRNA转染树突细胞（DC）诱导的特异性抗肿瘤免疫反应,为DC疫苗治疗胰腺癌提供实验依据。方法从外周血中分离单核细胞（PBMC）并培养成DC,从细胞形态和表面标志进行鉴定。通过RT-PCR扩增胰腺癌MiaPaCa-2细胞的MUC1 mRNA后用电穿孔法将其转染DC。采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测培养不同时间点DC的MUC1的表达。用四甲基偶氮唑蓝法检测DC存活率。采用51Cr标准细胞毒实验观察转染MUC1 mRNA的DC诱导的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应;应用ELASA法检测CTL的IFN-γ释放量。结果培养获得的细胞呈现典型的DC形态特征和表面标志(CD40+、HIA-DR+、CD83+、CD86+)。MUC1 mRNA转染DC 48 h后,细胞MUC1 mRNA表达水平最高,为38.43（36.89～48.06）,蛋白表达亦最强。转染后DC的存活率稳定在80%左右。转染MUC1 mRNA的DC可有效诱导HLA-A2+/MUC+特异性CTL免疫反应;胰腺癌Capan-2细胞与转染MUC1的DC刺激MUC1特异性CTL的24 h IFN-γ释放量分别为（28.44±4.96）和（16.31±2.54）U/ml,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论人胰腺癌MUC1 mRNA体外转染DC后可诱导CTL产生持异性抗肿瘤免疫反应。