石墨烯对氧化应激引起的毛细胞损伤的保护作用研究

摘要

目的 通过建立由H2O2诱导的HEI-OC1细胞氧化应激模型,验证石墨烯对氧化应激后毛细胞的保护作用,并探究石墨烯减轻毛细胞氧化应激损伤的可能机制.方法 我们将二维石墨烯材料(2D-G)作为实验组,TC玻片(TCPs)作为对照组.首先用不同浓度的H2O2处理接种于两种材料上的HEI-OC1细胞,分别作用4h和12h后,通过CCK-8法检测两组细胞存活率的差异,与此同时,通过免疫荧光法(通过观察myosin7a抗体,即毛细胞特异性抗体的染色情况)观察两组细胞的存活情况.接下来我们利用DCFH-DA和Mito-sox两种荧光探针分别测定细胞内和线粒体内ROS(活性氧)水平,运用流式分析法和免疫荧光法对氧化应激后的两组细胞内ROS水平的变化进行了直接和间接的检测.随后,我们通过TUNNEL法检测发生氧化应激后两组细胞凋亡水平的差异.结果 石墨烯能够显著提高短期/较长时间氧化应激后耳蜗毛细胞系HEI-OC1细胞的存活率;石墨烯能够显著降低氧化应激后HEI-OC1细胞内及线粒体内的ROS水平;石墨烯能够显著降低氧化应激后HEI-OC1细胞的凋亡水平.结论 石墨烯能够显著降低氧化应激后耳蜗类毛细胞系HEI-OC1胞质及线粒体内的ROS水平,从而抑制凋亡现象,对氧化应激引起的耳蜗毛细胞损伤具有一定的保护作用.