甲状旁腺素（1-34）对破骨细胞抑制性凝集素表达的调节及信号转导机制

摘要

目的探讨甲状旁腺素（parathyroid hormone,PTH）（1-34）对UMR106成骨细胞表达破骨细胞抑制性凝集素（osteoclastinhibitorylectin,OCIL）基因mRNA的调节及其信号转导机制。方法培养大鼠UMR106成骨细胞,采用PTH（1-34）及蛋白激酶A（PKA）、蛋白激酶C（PKC）、钙离子、MAPK通路的激动剂或阻断剂干预细胞不同时间后,收集细胞提取总RNA,实时荧光定量PCR检测OCILmRNA的表达水平。结果 PTH（1-34）以剂量和时间依赖方式促进OCILmRNA表达。10 nmol/LPTH（1-34）作用6 h后促进OCILmRNA表达,24 h上调效应最显著,约为对照组[未加入PTH（1-34）]的2.8倍。PTH（1-34）对OCIL mRNA表达促进作用的起始时间及高峰时间均晚于其对RANKL的诱导和对OPG的抑制。蛋白激酶A通路激动剂福司可林（FSK）、双丁酰基环腺苷磷酸（db-cAMP）及钙离子载体A23187均不同程度促进OCIL mRNA表达,最大上调效应分别约为对照组的4.2、4.5和5.1倍。蛋白激酶C激动剂佛波酯（PMA）作用早期（2~6 h）抑制OCIL mRNA表达,作用6h后最大抑制率达50%;PMA作用后期（24h）对OCILmRNA的抑制作用逆转为促进效应。PKA阻断剂KT5720、钙调蛋白（CaMK）阻断剂W-7、钙调蛋白激酶Ⅱ阻断剂KN-62及丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）阻断剂PD98059均下调PTH（1-34）诱导的OCIL mRNA表达,最大抑制率分别为56%、61%、63%和50%。各信号通路间存在交互作用。MAPK通路阻断剂PD98059减少PKA激动剂FSK或db-cAMP诱导的OCILmRNA表达,抑制率分别为98%和63%;但不影响A23187诱导的OCILmRNA水平增高。结论 PKA通路、钙/钙调蛋白通路和MAPK通路可介导PTH（1-34）诱导的OCIL mRNA表达。