利用RNA干扰诱导产生的CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞的免疫学特性

摘要

目的探讨通过RNA干扰技术诱导产生的CD8+CD28-抑制性T淋巴细胞（Ts细胞）的免疫学特性。方法取SD大鼠骨髓,培养分离树突状细胞（DC）,设计、合成主要组织相容性复合物（MHC）Ⅰ类小片段干扰RNA（siRNA）,以MHC Ⅰ siRNA转染DC。先以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液刺激转染MHC Ⅰ siRNA的DC,然后将DC与从SD大鼠脾脏分离得到的CD8+T淋巴细胞共同培养,通过磁珠法分离出Ts细胞。分别在由SD大鼠脾脏淋巴细胞（反应细胞）和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞（刺激细胞）组成的混合淋巴细胞培养体系中加入数量不等的Ts细胞,检测反应细胞增殖情况;分别以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞和卵白蛋白（OVA）刺激SD大鼠脾脏淋巴细胞,然后再按不同比例加入Ts细胞,检测各组脾脏淋巴细胞的增殖情况;在由SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入可溶性重组白细胞介素2（rrIL-2）,观察IL-2对Ts细胞功能的影响;采用实时定量聚合酶链反应（PCR）测定Ts细胞中转化生长因子β（TGF-β）和γ干扰素（IFN-γ）mRNA的表达,流式细胞仪和实时PCR检测Ts细胞上CD25分子的表达。结果 Ts细胞对SD大鼠脾脏淋巴细胞和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞之间的混合淋巴细胞反应（MLR）具有抑制作用,但对于SD大鼠脾脏淋巴细胞和OVA之间的MLR则无抑制作用。在SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入rrIL-2后,SD大鼠脾脏细胞的增殖并无明显增加（P＞0.05）。与CD8+CD28+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞比较,Ts细胞的TGF-β和IFN-γ mRNA的表达量明显升高（P＜0.01,P＜0.05）,而CD25的表达量明显降低（P＜0.05）。结论采用经MHC Ⅰ siRNA干扰的DC能够诱导CD8+T淋巴细胞产生CD8+CD28- Ts细胞;Ts细胞在体外具有免疫抑制特性,其免疫抑制作用不被外源性IL-2所逆转,且其免疫调节作用具有抗原特异性。