食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞检测ABO血型抗体水平的新方法

摘要

目的探讨以食蟹猴皮质区肾小管上皮细胞（RCTEC）为靶细胞检测ABO血型抗体滴度的可行性。方法分离培养食蟹猴原代RCTEC,蛋白质印迹法和流式细胞术鉴定细胞的表型与纯度。利用流式细胞术分别检测ABO组织-血型抗原在RCTEC上的表达、RCTEC与人血清血型抗体的结合能力以及比较人红细胞与RCTEC测定血型抗体滴度的差异。结果分离得到的肾皮质细胞绝大部分是RCTEC。39.90%~73.80%的RCTEC表达ABO组织-血型抗原,且能与人血清中的血型抗体特异性结合。较长时间冻存对RCTEC的ABO)组织-血型抗原表达水平无明显影响,冻存前表达B型抗原的阳性细胞比例为39.90%,冻存10个月后复苏再培养9 d,阳性细胞的比例为39.65%。利用钥孔戚血蓝蛋白偶联的血型抗原A（KLH-A）致敏前后的食蟹猴血清对比原代RCTEC与人红细胞检测血型抗体滴度的效果,结果显示,在RCTEC检测组,未出现凝集现象,与两种血清中抗体结合的几何平均荧光强度（MFI）均在最低血清稀释度（1:16）时最高,其后均随血清稀释度的增加而逐渐降低,未致敏血清的MFI值在稀释度为1:128时降至基线水平,致敏血清的MFI值在1:8 192稀释度时降至基线水平,在1:16~1:8 192稀释度之间,未致敏血清的MFI值均低于致敏血清;在人红细胞检测组,当抗体滴度高时凝集现象明显,未致敏血清MFI值的最高峰出现在1:64稀释度时,致敏血清MFI值的最高峰出现在1:32稀释度时,且随血清稀释度的增加呈现无明显规律的波动,在1:64~1:512稀释度之间,未致敏血清MFI值高于致敏血清。利用RCTEC检测血型抗体滴度的MFI值能较准确地反映抗体滴度的变化。结论食蟹猴RCTEC高表达ABO)组织-血型抗原,比人红细胞更适用于血清中血型抗体滴度的流式细胞术检测,具有良好的临床与科研应用潜力。