RT-PCR-ELISA法定量检测人FGF mRNA

摘要

目的:建立一种灵敏、特异、精确的定量检测人成纤维细胞生长因子mRNA(FGF mRNA)的逆转录-聚合酶链反应-酶联免疫吸附分析技术.方法:设计两条特异探针,其序列分别与FGF mRNA RT-PCR产物的一条链的不同区域互补.其中一条为带有氨基修饰的捕获探针,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合,另一条为标记生物素的检测探针.提取人外周血单个核细胞总RNA,进行RT-PCR扩增,产物热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交,最后加入链亲和素-辣根过氧化物酶(SAV-HRP)及底物,在450 nm波长处检测吸光度.结果:该方法检测FGFmRNA灵敏度高、特异性好,与非目的扩增产物杂交无阳性信号;重复性良好.结论:本方法具有操作简单、灵敏度高、特异性好的优点,适合于FGF mRNA的定量检测.