利用体内噬菌体展示技术筛选肝癌组织特异性结合肽

摘要

目的筛选人源肝癌组织特异性结合短肽.方法体外培养人源肝癌细胞株BEL-7402,建立荷瘤裸鼠模型.尾静脉注射噬菌体12肽文库至荷瘤裸鼠体内,循环20 min后回收肿瘤组织中噬菌体,同时取正常对照组织进行噬菌体效价测定和免疫组化观察.将回收的噬菌体扩增、纯化,并以此作为起始物进行下一轮筛选.经过3轮体内筛选,得到与肝癌组织或细胞特异结合的肽段.随机挑选噬菌体单克隆进行测序,分析序列同源性后进行体外细胞酶联免疫吸附试验(ELISA)和体内回输实验,验证噬菌体克隆的导向性.结果经过3轮体内筛选,瘤组织中噬菌体的回收率逐步提高,回收量随着输入量的增加迅速增加,而每轮筛选肝组织中的噬菌体回收量始终保持在一个恒定范围,并不随输入量的增加而增加.免疫组化结果显示,第3轮筛选后,瘤组织中的噬菌体得到高水平富集,同时其他组织的非特异性结合降至最低.肝癌细胞特异性结合最强的是A54号单克隆,A67、B2号单克隆次之.B2的导向效果最好,A54次之.通过对噬菌体单克隆的序列分析,初步确定了PSS/PTT基序.结论利用体内噬菌体展示技术,可以成功筛选到与肝癌细胞或组织特异结合的噬菌体肽.