贝伐单抗联合SN-38抑制结肠癌细胞增殖的机制

摘要

目的探讨贝伐单抗联合伊立替康（CPT-11）的活性代谢产物SN-38对结肠癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法在缺氧条件下,将贝伐单抗和SN-38作用于人结肠腺癌细胞LoVo,应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,检测药物对细胞增殖的抑制作用。分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot和酶联免疫吸附试验（ELISA）,分析药物作用后缺氧诱导因子1α（HIF-1α）及血管内皮生长因子（VEGF）在基因和蛋白表达水平的变化;通过药物对丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）和磷脂酰三磷酸肌醇-丝苏氨酸蛋白激酶（P13K-AKT）通路的影响,分析贝伐单抗和SN-38的联合作用机制。结果贝伐单抗联合SN-38序贯给药方案较同时给药对细胞增殖的抑制更强,且以先SN-38后贝伐单抗的给药顺序作用最强,IC50值为（0.057±0.009）μmol/L,较相反给药顺序强3.8倍,较同时给药强8.9倍。HIF-1α的表达水平随着缺氧时间的延长而升高,贝伐单抗和SN-38同时作用可显著抑制其表达;VEGF的表达也随着缺氧时间的增加逐渐增加,SN-38作用12 h以上可使VEGF表达下降59.4%,200μg/ml的贝伐单抗作用8 h几乎可完全抑制VEGF表达,此时加入SN-38仍可使VEGF表达进一步降低。MAPK通路的p-ERK表达随缺氧时间的增加而升高,SN-38和贝伐单抗同时作用可使p-ERK的表达完全阻断,这与两药对HIF-1α的抑制是一致的。ERK的选择性抑制剂PD98059能够增强贝伐单抗对p-ERK的抑制,同时也增加了贝伐单抗对HIF-1α的抑制。p-AKT的表达虽然随着缺氧时间的延长有所升高,但贝伐单抗和SN-38对其影响并不显著。结论 VEGF靶向药物联合化疗药物对细胞增殖的抑制是方案依赖性的,贝伐单抗和SN-38通过对HIF-1α和MAPK通路的调控发挥协同作用。