联合干扰人端粒酶逆转录酶和端粒重复序列结合因子2基因的表达对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

摘要

目的探讨联合干扰人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因和端粒重复序列结合因子2（TRF2）基因在乳腺癌基因治疗中的协同效应。方法构建表达小分子干扰RNA（siRNA）-hTERT和siRNA-TRF2的重组腺病毒载体rAd-hTERT和rAd-TRF2,单独或联合转染人乳腺癌MCF-7细胞。采用Western blot法检测MCF-7细胞中hTERT和TRF2蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测MCF-7细胞的增殖抑制情况,采用流式细胞仪检测MCF-7细胞的细胞周期变化,采用细胞平板克隆形成实验检测MCF-7细胞的克隆形成能力。结果转染48 h后,PBS对照组、空载体对照组、阴性对照组、rAd-hTERT转染组、rAd-TRF2转染组以及rAd-hTERT和rAd-TRF2联合转染组乳腺癌MCF-7细胞中hTERT蛋白的相对表达量分别为1.00、0.94±0.02、0.95±0.04、0.18±0.04、0.95±0.01和0.18±0.04;TRF2蛋白的相对表达量分别为1.00、1.01±0.08、0.96±0.02、0.95±0.08、0.22±0.01和0.26±0.02。单独转染rAd-hTERT或rAd-TRF2后,乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率仅为54.6%和48.4%,有8.9%±1.2%和9.2%±2.3%的细胞进入分裂期,66.4%±1.5%和64.6%±1.9%的细胞阻滞于G0+G1期,细胞的克隆形成能力显著下降;联合转染rAd-hTERT和rAd-TRF2后,乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率高达82.1%,进入分裂期的MCF-7细胞明显减少（为4.4%±1.2%）,大量细胞阻滞于G0+G1期（为81.4%±1.3%）,细胞的克隆形成能力下降更加明显。结论联合干扰hTERT和TRF2基因较单基因干扰可获得更有效的乳腺癌基因治疗效果。