花生类受体蛋白激酶AhAlSRK的原核表达与体外活性分析

摘要

基于对已有转录组数据的分析,发现花生AhAlSRK(LOC107458489)基因在耐铝花生品种99-1507和铝敏感型花生品种中花2号(ZH 2号)受铝毒害后基因表达量出现明显差异,暗示其可能参与花生铝胁迫下信号传递铝胁迫响应机制.花生AhAlSRK基因与拟南芥富含亮氨酸类受体蛋白激酶(leucine-rich repeat receptor-like kinases,LRR-RLKs_2亚家族中的AT1G56140基因具有相似的结构,为同源基因.为验证花生AhAlSRK蛋白激酶活性,克隆了AhAlSRK的全长编码序列,并基于对AhAlSRK蛋白结构预测的基础上,克隆了AhAlSRK的胞内域,构建其原核表达载体pGEX-6p-1-AhAlSRK-CD,转入大肠杆菌菌株Rosetta 2(DE3)plysS.在1 mmol/L IPTG条件下,16℃低温诱导过夜,成功诱导可溶性GST-AhAlSRK-CD蛋白.重组蛋白GST-AhAlSRK-CD表达效率较高,经过自磷酸化检测验证其具有丝/苏氨酸和酪氨酸激酶活性.实验结果为后续在蛋白质水平上探究AhAlSRK基因响应铝胁迫机理打下基础.