玻璃体液诱导视网膜色素上皮细胞间质转分化作用

摘要

目的观察人玻璃体液体外培养诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞间质转分化作用。方法将3～5代传代人RPE细胞分为普通培养组和玻璃体液培养组,分别应用普通培养液和25%玻璃体液进行培养。采用相差显微镜观察两组细胞形态变化,细胞爬片检测肌动蛋白细胞骨架的变化。分别用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法及Ⅰ型胶原凝胶收缩实验检测细胞迁移、侵袭及收缩力的变化。应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Snail1 mRNA的表达。结果相差显微镜观察发现,普通培养组细胞保持扁平形态,细胞接触广泛;玻璃体液培养组细胞一端呈扇形,另一端呈锥形拖尾形或梭形,细胞生长呈彼此分离的方式。细胞爬片结果显示,普通培养组肌动蛋白骨架主要分布于RPE细胞周边部,形如细胞周边的条带状;玻璃体液培养组肌动蛋白纤维在细胞的一端重排,形成扇形扁平状伪足突起,而在细胞另一端形成锥形拖尾改变。玻璃体液培养组与普通培养组比较,RPE迁移及侵袭能力显著增强（t=14.190、22.630）、细胞收缩能力显著下降（t=6.221）,差异均有统计学意义（P＜0.05）。RT-PCR检测结果显示,玻璃体液培养组与普通培养组比较,Snail1 mRNA表达显著上升（t=3.218,P=0.032）,α-SMA mRNA表达显著下降（t=3.990,P=0.016）,差异均有统计学意义。结论玻璃体液培养可诱导RPE细胞间质转分化。这一作用通过增强RPE细胞迁移及侵袭能力,抑制RPE细胞收缩力;提高RPE细胞Snail1 mRNA表达,下调α-SMA mRNA表达实现。