基质硬度通过YAP促进脑胶质瘤细胞上皮－间质转化和血管生成拟态形成的实验研究

摘要

目的 探讨基质硬度通过yes相关蛋白（YAP）促进脑胶质瘤细胞上皮间质转化（EMT）和血管生成拟态（VM）形成的机制。方法 在不同基质硬度条件下培养人脑胶质瘤U87细胞株,0.2、16.0和64.0 kPa 3种硬度分别代表正常大脑、胶质瘤和极度僵硬。以CCK8实验检测胶质瘤细胞的增殖能力,采用免疫荧光染色检测YAP细胞定位的改变,以实时定量PCR检测YAP靶基因CTGF、CRY61的表达,以蛋白印迹实验检测YAP及细胞增殖信号Akt、ERK 1/2的磷酸化表达。通过免疫荧光染色和蛋白印迹实验检测EMT相关蛋白Vimentin、E-cadherin、Twist的表达。在软、硬基质3D培养下检测VM形成的情况。转染shYAP慢病毒后,检测YAP干扰对基质硬度作用于胶质瘤细胞的增殖、间质蛋白（Vimentin和Twist）表达和VM形成的影响。结果 随着基质硬度的增高,胶质瘤细胞的增殖活性及其增殖信号通路Akt、ERK 1/2的磷酸化表达增加（均P＆0.05）,胶质瘤细胞的YAP核转位增加,磷酸化YAP的表达逐渐下降（P＆0.05）,而CTGF和CRY61基因的表达均升高（均P＆0.05）。免疫荧光染色和蛋白印迹实验结果表明,随着基质硬度的增高,EMT元件Vimentin、Twist的表达增高,上皮标志E-cadherin的表达减低（均P＆0.05）。与软基质3D培养下相比,硬基质培养条件下U87细胞VM管样结构的形成增多（P＆0.05）。干扰YAP的表达可减低较高的基质硬度促进胶质瘤细胞增殖、Vimentin和Twist的表达以及VM形成的作用（均P＆0.05）。结论 基质硬度可通过YAP促进胶质瘤细胞的增殖、EMT以及VM形成,靶向调控基质硬度和YAP可能可以作为胶质瘤治疗的新策略。