P2X7受体抑制剂通过神经连接蛋白负性调控癫痫发生过程

摘要

目的 分析癫痫发作后24 h内P2X7受体（P2X7R）和神经连接蛋白（NLGN）的表达特点,并探讨P2X7R抑制剂负性调控癫痫发生过程的可能机制。方法 将健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为6组,分别为1 h、3 h、6 h、12 h、24 h组及空白对照组（每组3只）；除空白对照组外,其余组均制备为氯化锂－匹鲁卡品癫痫模型,Racine评分量表评级达4或5级为造模成功。依次于癫痫发作后1 h、3 h、6 h、12 h及24 h将各组大鼠处死,空白对照组与1 h组一同处理,采用蛋白免疫印迹法检测P2X7R、NLGN1及NLGN2在各组大鼠海马和内嗅皮质中的表达情况。进一步按随机数字表法将健康雄性SD大鼠分为干预组（造模前腹腔注射P2X7R抑制剂＋载体）和对照组（造模前腹腔注射等剂量生理盐水＋载体）,每组3只。记录两组大鼠药物诱发癫痫的潜伏时间,以判断癫痫持续状态的严重程度；之后采用蛋白免疫印迹法检测两组大鼠海马和内嗅皮质中NLGN1、NLGN2的表达情况,以判断P2X7R抑制剂对其表达的影响。结果 1 h、3 h、6 h、12 h及24 h组大鼠均造模成功。蛋白免疫印迹法结果显示,癫痫发作后1 h或3 h,P2X7R、NLGN1及NLGN2在癫痫模型海马和内嗅皮质中的相对表达量（海马：分别为1.194±0.053、2.367±0.336、2.319±0.234,内嗅皮质：分别为1.185±0.104、2.094±0.178、1.512±0.332）均高于空白对照组（海马：分别为1.014±0.046、1.108±0.101、1.134±0.177,内嗅皮质：分别为0.917±0.081、1.046±0.093、1.017±0.028；均P＆0.05）；且随发作时间延长,表达均有降低的趋势（均P＆0.001）。干预组药物诱发癫痫的潜伏时间较对照组长[分别为（34.5±2.6）min、（20.0±3.1）min,P＝0.029]。蛋白免疫印迹法检测结果显示,干预组海马中NLGN1和NLGN2的相对表达量（NLGN1：0.678±0.011,NLGN2：0.904±0.060）均低于对照组（NLGN1：1.031±0.039,NLGN2：1.135±0.079；均P＆0.05）,而内嗅皮质中NLGN1和NLGN2的相对表达量,两组间差异均无统计学意义（均P＆0.05）。结论 癫痫发作后1 h或3 h内,P2X7R和NLGN蛋白在海马和内嗅皮质中的表达量均明显增加,且在发作后24 h内,随发作时间延长呈降低的趋势；P2X7R抑制剂可通过抑制海马区NLGN的表达进而负性调控癫痫发生过程。