替莫唑胺对胶质瘤干细胞抗凋亡与多重耐药基因及细胞周期的影响

摘要

目的分析替莫唑胺（TMZ）对胶质瘤U251细胞及其干细胞livin、MRP基因表达及细胞周期的影响。方法分离培养U251细胞及其干细胞后,不同浓度的TMZ（0、25、50、100、200、400μmol/L）干预72 h,CCK-8检测细胞增殖变化趋势,流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化,RTPCR技术检测livin、MRP1、MRP3 mRNA表达。结果本研究成功从U251细胞中分离出U251干细胞;与未干预组相比,25μmol/L的TMZ干预U251细胞及其干细胞后其增殖率分别为0.952±0.011（t=-8.219,P=0.001）、0.937±0.029（t=-3.822,P=0.019）和100μmol/L的TMZ干预U251细胞及其干细胞后其增殖率分别为0.750±0.018、0.887±0.039（t=5.480,P=0.005）;正常情况下,livin基因在U251细胞及其干细胞中的表达量分别为（0.411±0.025）×10-3、（0.571±0.040）×10-3（t=-3.348,P=0.004）,MRP1基因的表达量分别为（0.295±0.018）×-3、（0.481±0.034）×10-3（t=-8.439,P=0.001）,MRP3基因的表达量分别为（1.128±0.117）×10-3、（0.963±0.059）×10-3（t=2.176,P=0.095）;200μmol/L的TMZ干预U251细胞及其干细胞后livin mRNA表达量在分别为（0.020±0.002）×10-3（t=27.123,P=0）、（0.066±0.007）×10-3（t=21.345,P=0）;200μmol/L干预后MRPI mRNA表达量为（0.556±0.041）×10-3（t=-10.214,P=0.001）、（0.609±0.044）×10-3（t=-3.98,P=0.016）;200μmol/L干预MRP3 mRNA表达量为（1.397±0.192）×10-3（t=-2.073,P=0.107）、（1.496±0.302）×10-3（t=-2.993,P=0.040）;100μmol/L干预后细胞周期U251细胞G2/M期百分比为11.353±0.516、39.1±1.2（t=-37.1,P=0）和U251干细胞S期百分比为21.1±1.0、30.2±1.7（t=-8.07,P=0.001）。结论替莫唑胺能有效降低U251及其干细胞中livin基因的表达,并使细胞分裂周期停滞,降低细胞增殖率,促进细胞凋亡。MRP1和MRP3可能分别是原发胶质瘤与复发胶质瘤耐药的主要原因之一。