脑缺血后大鼠室管膜下区miR-34a及其相关靶基因、的动态表达及意义

摘要

目的观察大鼠脑缺血后室管膜下区微小RNA 34a（miR-34a）及其相关靶基因沉默信息调节因子2相关酶1（Sirt1）、核因子E2相关因子2（Nrf2）的表达变化,探讨miR-34a对脑缺血后内源性神经干细胞增殖的影响。方法 40只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、脑缺血1 d组、脑缺血3 d组、脑缺血7 d组,每组10只。后3组采用线栓法制备成大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血模型,并分别于造模1、3、7 d后取室管膜下区进行实验。采用免疫荧光染色检测各组大鼠神经干细胞标志物巢蛋白（nestin）的表达,采用荧光定量PCR检测miR-34a、Sirt1、Nrf2 mRNA的表达水平,采用Western blotting检测Sirt1、Nrf2蛋白的表达水平。结果 （1）脑缺血1 d组、脑缺血3 d组、脑缺血7 d组nestin阳性细胞计数逐渐增加[（2.013±0.526、4.821±1.154、6.394±1.027）个/视野],差异均有统计学意义（P＆0.05）。（2）脑缺血1 d组、脑缺血3 d组、脑缺血7 d组miR-34a mRNA的表达水平逐渐增高（0.295±0.145、0.701±0.075、1.136±0.018）,Sirt1 mRNA的表达水平逐渐下降（0.835±0.024、0.620±0.153、0.278±0.110）,Nrf2 mRNA的表达水平逐渐下降（1.032±0.256、0.833±0.187、0.630±0.123）,Sirt1蛋白的表达水平逐渐下降（0.832±0.018、0.731±0.156、0.454±0.132）,Nrf2蛋白的表达水平逐渐下降（1.003±0.133、0.813±0.111、0.671±0.071）,差异均有统计学意义（P＆0.05）。（3）相关性分析显示,脑缺血后nestin阳性细胞计数与miR-34a mRNA的表达水平呈正相关关系（r=0.887,P=0.003）,与Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平呈负相关关系（r=-0.746,P=0.005;r=-0.521,P=0.013）,与Nrf2 mRNA和蛋白的表达水平呈负相关关系（r=-0.344,P=0.025;r=-0.863,P=0.000）。结论 MiR-34a有可能通过Sirt1/Nrf2途径调控脑缺血后内源性神经干细胞的增殖。