外泌体源性miR-124对创伤性脑损伤急性期小胶质细胞活化状态的作用研究

摘要

目的探讨外泌体源性微小RNA（miR）-124对创伤性脑损伤（TBI）大鼠急性期损伤区脑组织中小胶质细胞活化状态的作用,为TBI后神经炎症的干预提供实验依据。方法（1）将体外培养的HEK293细胞分为miR-124转染组和对照组,分别转染载有miR-124的质粒和空质粒,2～3周后分离出单克隆细胞系,继续培养2周后应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测2组细胞miR-124的含量;应用美国系统生物科技（SBI）试剂盒从2组细胞上清液中提取外泌体,电镜下观察外泌体的形态,应用Western blotting检测2组外泌体表面标记分子CD63的表达,RT-PCR检测2组外泌体内miR-124的含量。（2）60只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（n=12）、TBI组（n=24）和外泌体组（n=24）,后2组大鼠应用控制性皮层撞击（CC1）法建立TBI模型。造模后24 h,外泌体组大鼠通过尾静脉注入外泌体（3×10~9个微粒）,假手术组和TBI组大鼠注入等量溶剂。造模后3d,应用RT-PCR检测3组大鼠损伤区脑组织miR-124的表达,流式细胞术（FCM）检测脑组织Iba-1+/CD32+和Iba-1+/CD206+小胶质细胞所占百分比,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测脑组织促炎因子白介素（IL）-1、IL-6和抑炎因子IL-4、IL-10的表达。结果（1）RT-PCR检测显示miR-124转染组细胞miR-124的表达高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。电镜下显示有直径约100 nm的球形微小颗粒,并有明显的膜性结构;Western blotting检测显示miR-124转染组外泌体表面标记分子CD63的表达量明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR检测显示miR-124转染组外泌体miR-124的含量明显高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）外泌体组大鼠损伤脑组织中miR-124的表达高于TBI组和假手术组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与假手术组比较,TBI组大鼠损伤脑组织Iba-1+/CD32+和Iba-1+/CD206+小胶质细胞所占百分比增加、IL-1、IL-6和IL-4、IL-10的浓度增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;与TBI组比较,外泌体组大鼠损伤脑组织中Iba-1+/CD32+小胶质细胞所占百分比降低,Iba-1+/CD206+小胶质细胞所占百分比增高,IL-1、IL-6的浓度降低,IL-4、IL-10的浓度增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论外泌体源性miR-124可以促进TBI急性期损伤脑组织中小胶质细胞由M1型向M2型转化,从而减轻TBI的神经炎症。