梯度离心法制备骨髓间充质干细胞胞质体及其鉴定

摘要

目的建立制备骨髓间充质干细胞胞质体的方法,以用于体细胞核移植研究。方法（1）培养骨髓间充质干细胞,用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD71、CD11b;（2）用梯度离心法制备骨髓间充质干细胞胞质体,并用HE染色、Giemsa染色、荧光双标染色、透射电镜检查等方法进行鉴定,用台盼蓝染色检测其活性。结果（1）骨髓间充质干细胞呈长梭形、漩涡状生长,骨髓间充质干细胞表面标志物CD44、CD90、CD71表达阳性,CD11b表达阴性;（2）HE染色、Giemsa染色、荧光双标染色和透射电镜检查显示骨髓间充质干细胞经梯度离心后在15%～18%Ficoll400梯度层可收集到大量胞质体,胞质体可快速贴壁,表达CD71,与完整骨髓间充质干细胞相似,体积与完整细胞相比差别不大。有活性的胞质体比例达99.5%。结论用梯度离心法可有效获得骨髓间充质干细胞胞质体。