泛素羧基末端水解酶-1抑制剂对多巴胺能神经元的神经毒性作用

摘要

目的利用人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞观察泛素羧基末端水解酶-1（UCH-L1）抑制剂对多巴胺能神经元的毒性作用并探讨其可能的毒性机制。方法用不同浓度（5、10、25、50、75、100μmol/L）的UCH-L1抑制剂作用SK-N-SH细胞24h,MTT法检测细胞活力、Hoechst染色检测凋亡的细胞核及Western blot检测UCH-L1蛋白、单个泛素分子及多聚化泛素蛋白的表达、荧光检测泛素蛋白酶体系统（UPS）的功能。结果经UCH-L1抑制剂处理24h后SK-N-SH细胞突起样结构消失,细胞体积变小、形态变圆;随着UCH-L1抑制剂浓度的增加,细胞活性进一步下降;与对照组比较,细胞活力在抑制剂浓度为50μmol/L时,作用24 h后即出现明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;Hoechst染色可见凋亡细胞碎裂的细胞核;Western blot检测到细胞内UCH-L1蛋白表达没有变化、单个泛素分子水平下降、多聚泛素化蛋白增加;荧光检测显示UPS功能下降。结论 UCH-L1抑制剂在体外对多巴胺能神经元有毒性作用,可诱导细胞凋亡。在凋亡过程中,UPS功能下降、细胞内多聚泛素化蛋白堆积可能发挥了作用。