转染Notch2基因对人脑胶质瘤细胞系A172生长的抑制作用

摘要

目的探讨人脑胶质瘤细胞系A172转染Notch2基因后抑制细胞增殖情况及其机制。方法将A172细胞分为空白对照组、转染空载质粒组（pcDNA3）、转染Notch2质粒组（Notch2-pcDNA3）三组,后两组分别转染空载体和Notch2。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期和凋亡的影响,Transwell方法检测其对细胞侵袭的作用,Western blotting检测转染Notch2质粒后A172细胞中重要信号通路成员[Notch2、表皮生长因子受体（EGFR）、组织磷酸化蛋白（p-AKT）、胞内磷脂酰肌醇激酶（P13K）、人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）、细胞核因子κB（NF-κB）、增殖细胞核抗原（PCNA）、白细胞介素-2（Bcl-2）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）及周期素依赖性激酶抑制因子1（Cyclin D1）]相关基因的表达。结果 MTT实验结果显示,与对照组及pcDNA3组比较,A172细胞被转染Notch2后细胞存活率明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;S期及G2/M期细胞减少,G0/G1细胞较对照组相比增加22.1%,细胞明显被阻滞于G0/G1期;凋亡细胞数从对照组的1.2%9增加到14.8%:细胞侵袭数由对照组的35.23个降低至17.43个。与PI3K-AKT通路相关的重要成员EGFR、P-AKT、PI3K以及NF-κB、PCNA、Bcl-2、MMP-2、MMP-9及Cyclin D1等表达水平均有明显下调:而拮抗PI3K/AKT活性的抑癌蛋白PTEN以及Caspase-3的表达则明显上调。结论转染Notch2基因可抑制细胞增殖和侵袭,诱导细胞凋亡以及重要信号通路成员的基因表达变化。