干扰长链非编码RNA NEAT1可通过降低自噬抑制小胶质细胞的活化

摘要

目的探讨长链非编码RNA核富集转录体1（NEAT1）在小胶质细胞活化中的作用及潜在机制。方法 （1）体外常规培养小胶质细胞BV2,加入0、0.1、0.5、1μg/mL脂多糖（LPS）刺激6h后,RT-PCR检测细胞NEAT1 mRNA的表达;用1μg/mLLPS刺激BV2细胞0、6、12、24h后,RT-PCR检测细胞NEAT1 mRNA的表达;（2）将特异性NEAT1 siRNA（NEAT1-si）转染BV2细胞,RT-PCR、Westem blotting分别检测NEAT1-si组和对照组细胞微管相关蛋白1轻链3（LC3）mRNA和蛋白的表达;（3）将细胞分对照组、NEAT1-si组、LPS组、NEAT1-si+LPS组,RT-PCR检测细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的表达,荧光倒置显微镜观察BV2细胞的形态变化;（4）将细胞分为对照组、Torin-1组和NEAT1-si+Torin-1组,Western blotting检测细胞LC3蛋白的表达,RT-PCR检测细胞LC3、TNF-α、iNOS mRNA的表达。结果 （1）0和0.1μg/mL LPS组、0.5μg/mL LPS组、1μg/mL LPS组BV2细胞NEAT1 mRNA的表达依次增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;0、6、12、24 h组BV2细胞NEAT1 mRNA的表达依次增高,差异有统计学意义（P＜0.05）;（2）NEAT1-si组BV2细胞LC3-ⅡmRNA的表达低于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。Western blotting检测显示NEAT1-si组BV2细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ比值低于对照组（0.7 vs.1.03）;（3）RT-PCR检测显示:与对照组比较,NEAT1-si组细胞TNF-α、iNOS mRNA的表达降低,与LPS组相比,NEAT1-si+LPS组细胞TNF-α、iNOS mRNA的表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;（4）Western blotting检测显示对照组、Torin-1组、NEAT1-si+Torin-1组细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ比值分别为0.7、1.14、0.97。RT-PCR结果显示:与对照组比较,Torin-1组LC3-Ⅱ、TNF-α、iNOS mRNA的表达明显上调,差异有统计学意义（P＜0.05）;与Torin-1组相比,NEAT1-si+Torin-1组LC3-Ⅱ、TNF-α、iNOS mRNA的表达下调,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论下调NEAT1表达可通过降低自噬抑制小胶质细胞的活化,NEAT1有望成为缓解和治疗神经炎症相关疾病的新靶点。