空肠弯曲菌黏附蛋白(PEB1)基因工程疫苗外周神经安全性的实验研究

摘要

目的以空肠弯曲菌(campylobacter jejuni, CJ)菌体全抗原为对照,以基因重组的该菌融合黏附蛋白(TrxA/PEB1)作为CJ疫苗免疫大鼠,并对其神经安全性进行实验性评价. 方法分别以纯化的TrxA/PEB1和CJ Pen19菌体全抗原经全身免疫增强法免疫大鼠,初次免疫后第2、4、5周采用ELISA法动态观察抗体滴度,并分别于第 3、5周分离坐骨神经原纤维及行甲苯胺蓝染色光镜观察.采用ELISA法检测第5周抗血清与GM1抗原的结合反应.神经外膜下注射抗TrxA/PEB1和抗CJ 全菌抗原的特异性抗血清,观察其神经病理学改变. 结果 (1)经两种抗原免疫后,大鼠均产生高滴度特异性IgG,且各自与两种抗原发生交叉反应;(2)以CJ Pen19全抗原免疫后抗血清可与GM1抗原结合,而TrxA/PEB1免疫者则否;(3)CJ Pen19免疫组有60%大鼠坐骨神经出现以轴索变性为主的免疫性损伤,而TrxA/PEB1融合蛋白免疫者则未发生;(4)CJ Pen19免疫血清神经外膜下注射后全部大鼠均发生轴索变性为主的病变,且75%为显著病变,而TrxA/PEB1免疫血清外膜下注射后却未引起明显病变. 结论 CJ Pen19全菌抗原和TrxA/PEB1纯化蛋白作为免疫原均可激发大鼠有效体液免疫应答,但与CJ全菌抗原相比,TrxA/PEB1蛋白所产生的全身免疫反应未引起周围神经损伤,其抗血清不含针对GM1抗原的抗体,对外周神经无免疫损伤作用.据此可认为 TrxA/PEB1作为CJ疫苗安全可靠.