载脂蛋白E在神经母细胞瘤细胞内表达对细胞生长的影响

摘要

目的 观察人载脂蛋白E(apoE)在神经母细胞瘤细胞SK-N-SH内表达的分布情况及对细胞生长的影响.方法 构建含apoE eDNA和绿色荧光蛋白(GFP)基因的真核表达载体,转染至SK-N-SH细胞,经G418结合荧光动态监测筛选稳定表达人apoE基因的细胞克隆,荧光显微镜下观察GFP-apoE融合蛋白在SK-N-SH细胞中的表达.采用MTT法和流式细胞术观察apoE<,3>、apoE<,4>对细胞增殖和细胞周期的影响.结果 经酶切和DNA序列测定证实目的 基因已插入重组质粒,经G418筛选得到的SK-N-SH细胞克隆中存在apoE基因表达,其表达分布与GFP不同,呈点状分布.转染apoE<,3>的细胞增殖速度加快,GOG1期细胞比例降低,S期细胞增加;而转染apoE<,4>的细胞则相反,表现为增殖速度减缓,GOG1期细胞比例增加,S期细胞减少.结论 神经母细胞SK-N-SH细胞内apoE的表达对其生长具有表型特异性.通过建立稳定表达不同多态性的apoE的细胞克隆,为进一步研究apoE在神经细胞中的生物学功能以及apoE在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础.