塞来昔布诱导多囊肾囊肿衬里上皮细胞凋亡的实验研究

摘要

目的通过观察特异性环氧酶2（COX-2）抑制剂塞来昔布（celecoxib,CXB）诱导人多囊肾囊肿衬里上皮细胞凋亡,初步探讨该药诱导细胞凋亡的作用机制。方法（1）原代培养囊肿衬里上皮细胞,分为对照组、CXB组,采用Brdu法检测细胞增殖状态。（2）应用透射电镜观察细胞超微结构。（3）TUNEL法检测细胞凋亡及凋亡率。（4）应用AnnexinV+流式细胞术检测CXB诱导细胞凋亡及凋亡率。（5）应用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果（1）Brdu结果显示,CXB能抑制多囊肾囊肿衬里上皮细胞的增殖,在24～72 h,浓度为（0．25～2）×10-5 mol/L的范围内呈时间和剂量依赖性。（2）电镜下可见细胞核浓缩、染色质聚集、胞浆空泡化、凋亡小体出现、沟裂和裸核形成等典型凋亡征象。（3）TUNEL法显示,对照组细胞凋亡率为（2．8±0．2）%,2×10-5 mol/L CXB作用24、48 h细胞凋亡率为（28．5±1．6）%和（48．5±1．2）%,两者差异有统计学意义（P＜0．05）。（4）AnnexinV+流式细胞仪法结果显示,不同浓度(0．5、1、2×10-5 mol/L)CXB处理24 h凋亡率分别为（7．15±0．11）%、（7．76±0．08）%和（12．15±0．07）%,显著高于无血清对照组（3 15±0．05）%；不同浓度CXB处理48 h的凋亡率分别为（18．36±0．17）%、（24．87±0．25）%和（53．66±0．32）%,显著高于无血清对照组（13．53±0．21）%,组间差异均有统计学意义（P均＜0．01）。（5） Western印迹结果显示,随CXB作用时间延长,Bcl-2的表达逐渐减弱而Bax的表达逐渐增强,Bcl-2/Bax的比值逐渐减少。结论塞来昔布呈时间和剂量依赖性抑制囊肿衬里上皮细胞增殖,通过下调Bcl-2,上调Bax,减少Bcl-2/Bax的比值诱导细胞凋亡。本研究结果为将CXB用于治疗常染色体显性多囊肾病提供了实验依据。