缺氧时丝裂原激活蛋白激酶类对人肾小管上皮细胞富含半胱氨酸蛋白61基因转录活性的调控

摘要

目的探讨丝裂原激活蛋白激酶类（MAPKs）对缺氧条件下人近端肾小管上皮细胞（HKC）中富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）基因转录活性的调控机制。方法缺氧培养HKC,Northern印迹检测Cyr61 mRNA表达;Western印迹检测Cyr61、p38、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、c-Jun-N末端蛋白激酶（JNK）以及缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达。构建含有人Cyr61基因启动子的报告基因Cyr61-luc质粒,将其单独或者分别与表达活性MAPKs的质粒Ca-MEK1和Ca-MKK6共同瞬时转染HKC。通过荧光素酶活性检测观察缺氧、MAPKs抑制剂和MAPKs活性酶对Cyr61基因转录活性的调控。结果缺氧时HKC表达Cyr61、HIF-1α增高,ERK1/2、JNK、p38总量不变,而其各自的磷酸化形式均明显增加。HKC转染Cyr-luc后, p38通路抑制剂SB203580和ERK通路抑制剂PD98059显著抑制缺氧时Cyr61的转录活性,两者协同作用时抑制作用显著增强。Ca-MEK1与Cyr-luc共转染HKC后,Cyr61转录活性无改变;而Ca-MKK6与Cyr-luc共转染后,Cyr61转录活性显著增高。对缺氧培养的HKC,PD98059处理使HIF-1α和Cyr61蛋白表达显著降低;SB203580处理可显著降低Cyr61蛋白表达,但对HIF-1α无影响。结论在HKC中,缺氧呵通过p38通路直接上调Cyr61基因启动子活性,也可通过ERK1/2途径促进HIF-1α表达,间接调节Cyr61基因启动子活性。