巢蛋白在足突广泛融合的肾小球中表达下调及与蛋白尿程度的相关性

摘要

目的观察中间丝蛋白类的巢蛋白（nestin）在足突广泛融合的肾小球中的表达及其与足突病变动态过程和蛋白尿产生的关系。方法免疫组化法检测nestin在人正常肾组织及微小病变肾组织中的表达。构建氨基核苷嘌呤霉素肾病大鼠模型,应用免疫组化、荧光实时定量PCR、Western印迹法检测注射嘌呤霉素后第1、4、10、20天大鼠。肾小球中nestin的分布与表达;电镜观察肾脏足细胞改变,测定尿蛋白量（24 h）。分析nestin的变化与蛋白尿的相关性。结果免疫组化显示nestin在人类微小病变肾小球中的表达较正常组织显著下调（0.93±0.08比1.65±0.12,P＜0.05）。在嘌呤霉素损伤足细胞早期,肾小球nestin的表达曾有一过性增加（mRNA和蛋白水平分别为对照组的1.23倍和1.48倍,P＜0.05）,随后持续下降。nestin的mRNA水平在嘌呤霉素注射后第4天时降至对照组的35.8%;第10天时为对照组的12.1%（均P＜0.01）;病变好转后开始上升,恢复为对照组的65.8%（P＜0.05）。Western印迹检测nestin蛋白改变也有类似的趋势,嘌呤霉素注射后第4天,nestin蛋白水平有所下降,为对照组的77.0%（P＜0.05）;至大量蛋白尿的第10天,nestin蛋白水平仅为对照组的58.0%（P＜0.05）;而随着病变的恢复,嘌呤霉素注射后第20天时nestin蛋白量恢复为对照的83.4%。Pearson相关分析结果显示,注射嘌呤霉素后nestin mRNA（r=-0.667,P＜0.05）及蛋白（r=0.621,P＜0.05）表达与尿蛋白量（24 h）均呈负相关。结论在以足突广泛融合为特征的肾脏病变中,肾小球中间丝蛋白nestin表达显著减少,并与蛋白尿程度呈负相关,提示nestin可能参与了足细胞形态和功能的维持。